Fluorescence resonance energy transfer (FRET)
Ang fluorescence resonance energy transfer (FRET) ay isang non-radiative na proseso ng paglilipat ng enerhiya kung saan ang donor excited state energy ay inililipat sa acceptor excited state sa pamamagitan ng intermolecular electric couples.Ang prosesong ito ay hindi nagsasangkot ng mga photon at samakatuwid ay non-radiative.Ang assay na ito ay may mga pakinabang ng pagiging mabilis, sensitibo at simple.
Ang tina na ginamit sa FRET assay ay maaaring magkapareho.Ngunit sa karamihan ng mga aplikasyon, iba't ibang mga tina ang aktwal na ginagamit.Sa madaling sabi, ang paglipat ng luminous resonance energy ay ang paglipat ng isang pares ng dipoles mula sa donor (dye 1) patungo sa acceptor (dye 2) kapag nasasabik ang donor group.Sa pangkalahatan, ang emission spectrum ng Donor fluorophore group ay magkakapatong sa absorption spectrum ng Acceptor group."Kapag ang distansya sa pagitan ng dalawang fluorophores ay angkop (10 - 100 A), ang paglipat ng fluorophore energy mula sa donor patungo sa acceptor ay maaaring maobserbahan."Ang paraan ng paglipat ng enerhiya ay nakasalalay sa istraktura ng kemikal ng receptor:
1. Na-convert sa molecular vibration, iyon ay, ang maliwanag na liwanag ng paglipat ng enerhiya ay nawawala.(Ang receptor ay isang light quencher)
2. Ang emission ay mas matindi kaysa sa mismong receptor, na nagreresulta sa isang redshift sa pangalawang fluorescence spectrum."(Ang mga receptor ay maliwanag na naglalabas).
Ang donor group (EDANS) at acceptor gene (DABCYL) ay pare-parehong naka-link sa natural na substrate ng HIV protease, at kapag ang substrate ay hindi naka-disconnect, ang DABCYL ay maaaring sugpuin ang EDANS at pagkatapos ay maging undetectable sa fluorine.Sa pagdiskonekta ng HIV-1 na protease, ang EDANS ay hindi na pinapatay ng DABCYL, at ang EDANS luciferases ay maaaring makita pagkatapos.Ang pagkakaroon ng mga inhibitor ng protease ay maaaring masubaybayan ng mga pagbabago sa intensity ng fluorescence ng EDANS.
Ang mga FRET peptides ay maginhawang mga tool upang pag-aralan ang peptidase nonspecificity.Dahil ang proseso ng reaksyon nito ay maaaring patuloy na masubaybayan, nagbibigay ito ng isang maginhawang paraan para sa pag-detect ng aktibidad ng enzyme.Ang ningning na ginawa pagkatapos ng hydrolysis ng mga peptide bond ng donor/acceptor ay nagbibigay ng sukatan ng aktibidad ng enzyme sa mga nanomolar na konsentrasyon.Kapag buo ang FRET peptide, nagpapakita ito ng biglaang paglaho ng internal flash, ngunit kapag ang anumang peptide bond na nasa tapat ng donor/acceptor ay nasira, naglalabas ito ng flash, na maaaring ma-detect nang tuloy-tuloy at masusukat ang aktibidad ng enzyme.
Oras ng post: Aug-14-2023