Bilang isang instrumento na may mataas na katumpakan, ang HPLC ay madaling humantong sa ilang maliliit na problema kung hindi ito pinapatakbo sa tamang paraan habang ginagamit.Ang isa sa mga pinakakaraniwang problema ay ang problema sa compression ng column.Paano mabilis na i-troubleshoot ang isang may sira na chromatograph.Ang sistema ng HPLC ay pangunahing binubuo ng isang bote ng reservoir, isang bomba, isang injector, isang haligi, isang silid ng temperatura ng haligi, isang detektor at isang sistema ng pagproseso ng data.Para sa buong sistema, ang mga haligi, bomba at detektor ay ang mga pangunahing bahagi at ang pangunahing mga lokasyon na madaling kapitan ng mga problema.
Ang susi sa presyon ng haligi ay ang lugar na nangangailangan ng malapit na pansin kapag gumagamit ng HPLC.Ang katatagan ng presyon ng haligi ay malapit na nauugnay sa chromatographic peak na hugis, kahusayan ng haligi, kahusayan sa paghihiwalay at oras ng pagpapanatili.Ang katatagan ng presyon ng column ay hindi nangangahulugan na ang halaga ng presyon ay stable sa isang matatag na halaga, ngunit sa halip na ang hanay ng pagbabagu-bago ng presyon ay nasa pagitan ng 345kPa o 50PSI (nagbibigay-daan para sa paggamit ng gradient elution kapag ang presyon ng column ay stable at dahan-dahang nagbabago).Ang masyadong mataas o masyadong mababang presyon ay isang problema sa presyon ng haligi.
Ang pinaka-prone sa mga pagkabigo at solusyon ng HPLC
1, ang mataas na presyon ay ang pinakakaraniwang problema sa paggamit ng HPLC.Nangangahulugan ito ng biglaang pagtaas ng presyon.Sa pangkalahatan, may mga sumusunod na dahilan: (1) Sa pangkalahatan, ito ay dahil sa pagbara ng channel ng daloy.Sa puntong ito, dapat nating suriin ito nang paisa-isa.a.Una, putulin ang pumapasok ng vacuum pump.Sa puntong ito, ang PEEK tube ay napuno ng likido upang ang PEEK tube ay mas maliit kaysa sa solvent na bote upang makita kung ang likido ay tumutulo sa kalooban.Kung ang likido ay hindi tumutulo o tumutulo nang dahan-dahan, ang solvent filter head ay naharang.Paggamot: Ibabad sa 30% nitric acid sa loob ng kalahating oras at banlawan ng ultrapure na tubig.Kung random na pumatak ang likido, ang solvent filter head ay normal at sinusuri;b.Buksan ang Purge valve upang ang mobile phase ay hindi dumaan sa haligi, at kung ang presyon ay hindi makabuluhang nabawasan, ang filter na puting ulo ay naharang.Paggamot: Ang mga na-filter na whiteheads ay inalis at nilagyan ng sonicated na 10% isopropanol sa loob ng kalahating oras.Ipagpalagay na ang presyon ay bumaba sa ibaba 100PSI, ang na-filter na puting ulo ay normal at sinusuri;c.Alisin ang dulo ng labasan ng haligi, kung ang presyon ay hindi bumababa, ang haligi ay naharang.Paggamot: Kung ito ay isang buffer salt blockage, banlawan ng 95% hanggang sa maging normal ang pressure.Kung ang sagabal ay sanhi ng ilang mas mataas na napreserbang materyal, isang mas malakas na daloy kaysa sa kasalukuyang mobile phase ang dapat gamitin upang magmadali patungo sa normal na presyon.Kung ang pangmatagalang presyon ng paglilinis ay hindi bumababa ayon sa pamamaraan sa itaas, ang pumapasok at labasan ng haligi ay maaaring ituring na konektado sa instrumento sa kabaligtaran, at ang haligi ay maaaring malinis gamit ang mobile phase.Sa oras na ito, kung ang presyon ng haligi ay hindi pa rin nabawasan, ang entrada ng haligi ng sieve plate ay maaari lamang mapalitan, ngunit kapag ang operasyon ay hindi maganda, madaling humantong sa pagbawas ng epekto ng haligi, kaya subukang gumamit ng mas kaunti.Para sa mahihirap na problema, maaaring isaalang-alang ang pagpapalit ng column.
(2) Maling setting ng flow rate: Maaaring i-reset ang tamang flow rate.
(3) Maling ratio ng daloy: ang index ng lagkit ng iba't ibang proporsyon ng mga daloy ay iba, at ang kaukulang presyon ng sistema ng daloy na may mas mataas na lagkit ay mas malaki din.Kung maaari, ang mga solvent na may mababang lagkit ay maaaring palitan o muling itakda at ihanda.
(4) System pressure zero drift: ayusin ang zero ng liquid level sensor.
2, ang presyon ay masyadong mababa (1) ay kadalasang sanhi ng system leakage.Ano ang gagawin: Hanapin ang bawat koneksyon, lalo na ang interface sa magkabilang dulo ng column, at higpitan ang leak area.Alisin ang poste at higpitan o linya ang PTFE film na may naaangkop na puwersa.
(2) Ang gas ay pumapasok sa bomba, ngunit ang presyon ay karaniwang hindi matatag sa oras na ito, mataas at mababa.Mas seryoso, hindi maa-absorb ng pump ang fluid.Paraan ng paggamot: buksan ang balbula sa paglilinis at linisin sa rate ng daloy na 3~5ml/min.Kung hindi, ang mga bula ng hangin ay hinihigop sa balbula ng tambutso gamit ang isang nakalaang tubo ng karayom.
(3) Walang mobile phase outflow: suriin kung mayroong mobile phase sa reservoir bottle, kung ang lababo ay nakalubog sa mobile phase, at kung ang pump ay tumatakbo.
(4) Ang reference valve ay hindi nakasara: ang reference valve ay sarado pagkatapos ng deceleration.Karaniwan itong bumababa sa 0.1.~ 0.2mL/ min pagkatapos isara ang reference valve.
Buod:
Sa papel na ito, ang mga karaniwang problema lamang sa liquid chromatography ang sinusuri.Siyempre, sa aming praktikal na aplikasyon, makakatagpo kami ng higit pang iba pang mga problema.Sa paghawak ng fault, dapat nating sundin ang mga sumusunod na prinsipyo: baguhin lamang ang isang kadahilanan sa isang pagkakataon upang matukoy ang kaugnayan sa pagitan ng hypothetical na kadahilanan at ang problema;Sa pangkalahatan, kapag pinapalitan ang mga bahagi para sa pag-troubleshoot, dapat nating bigyang-pansin ang paglalagay ng mga nalansag na buo na bahagi sa lugar upang maiwasan ang basura;Ang pagbuo ng isang mahusay na ugali sa rekord ay ang susi sa tagumpay ng paghawak ng fault.Sa konklusyon, kapag gumagamit ng HPLC, mahalagang bigyang-pansin ang sample pretreatment at tamang operasyon at pagpapanatili ng kagamitan.
Oras ng post: Set-18-2023